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Assayquant熒光底物簡介

更新時間:2022-07-20      點擊次數:1408




Assayquant熒光底物簡介

Assayquant公司致力于開發激酶和磷酸酶的熒光底物。Assayquant的底物含SOX (sulfonamido-oxine) 熒光團,可以實時的測量酶活性,用持續的反應曲線來了解抑制劑的作用機理,而非用市面上其它技術采用的終點測試法。Assayquant采用體內自然底物的序列,測試的結果生理相關,生化實驗和體內實驗具有強的相關性。


熒光團 - Sox 熒光團非常小,具有低的疏水性。當Sox 熒光團和鎂子以及磷酸結合后可以在485nm發射熒光。市面上廣泛應用的讀板儀都可以用來讀取熒光。 不僅如此,用銪離子(Eu3+)代替鎂離子 (Mg2+),可以終止持續反應,用時間分辨熒光,在620nm檢測信號,從而避免化合物的自身熒光干擾。標記熒光團的底物多肽- Assayquant擁有>30,000 種熒光多肽,包括針對野生型以及突變體的絲/蘇氨酸和酪氨酸激酶。Sox熒光團通過共價鍵連接到底物多肽磷酸位點的附近。至今為止, AssayQuant 已經發展了 針對>400多種激酶和磷酸酶的 測量試劑盒以及熒光多肽底物。Assayquant還提供抑制劑機理測試以及激酶組的特異性測試。

Assayquant技術主要成分

持 續

持續的反應曲線提供 大量的反應數據,對比其它技術只能拿到一個終數據

直 接 直接測量激酶反應,而不是間接多步測量酶反應的產品生理相關 底物序列采用人體內自然底物序列,無需加入其它非自然的氨基酸序列簡單易用 只要擁有市面上常見的熒光讀板儀即可,實驗操作超級簡單創 新 全新概念,突破市面上其它技術的局限靈 活 不受ATP濃度的限制,可以在ATP Km以及生理濃度(1mM)測試適用廣 不需轉換不同平臺, 適用于整個藥物開發過程-從HTS到臨床前期



用 I C50, EC50 and Ki 來衡量抑制劑的效能可以同時比較多種抑制劑的效能Tarceva,EGFR的抑制劑梯度稀釋到0.085nM-5000nM 之后與EGFR 野生型和突變體 (T790M/L858R)混合反應。結果證明突變體比野生型對抑制劑的敏感性降低了380倍,表明突變體具有較強的抗藥性。





Assayquant的技術即適用于動力研究,也適用于終點測試。只需在動力反應結束后加入Eu3+,即可把反應變成紅移(red shift)反應測試。對于HTS,采用加入Eu3+ 進行終點測試可以在620nm用時間分辨熒光以及加入100µsec讀取延遲來讀取數據。從而避免化合物自身熒光的干擾。

 

 

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