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glenresearch 60-5000-96說明書

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glenresearch  60-5000-96說明書

Quenching buffer for Glen-Pak™ purification reagent RNA purification



1. Size: Select a Pack Size
250 mL
1 L
2. Format: Select a Format
1000mL Nalgene
250mL Nalgene


Glen Pak的原則™ DNA/RNA純化

與Poly Pak一樣™ 墨盒,Glen Pak™ 盒利用保留在寡核苷酸上的5’DMT將全長序列特異性結合到支持物上。在純化過程中,故障序列被消除,DMT隨后被去除,從而允許純化產物的洗脫。

與傳統固相相比,Glen-Pak凈化系統有許多優點

萃取(SPE)系統。

多才多藝

直接純化寡核苷酸,無需任何預純化干燥步驟,來源:

? 氫氧化銨

? AMA(氫氧化銨/40%甲胺水溶液1:1)

? 叔丁胺/水1:3(v/v)(1)

? 甲醇中的50mM碳酸鉀(2)

? 甲醇/水中0.4M氫氧化鈉4:1(v/v)(3)

使用適用于手持式注射器、真空歧管或高通量96孔板的筒。

(1) 加載前,用100 mg/mL氯化鈉1:7(v/v)稀釋叔丁胺/水溶液。

(2) 稀釋50mM鉀

image.png


Purification of DNA Oligonucleotides (DMT-ON) 

Materials                                                                                                                                       Amount Used 

Glen-Pak DNA Purification Cartridge (60-5100-XX, 60-5200-XX)                                                      1 

Vacuum manifold (96 well or 12-24 port SPE type, if appropriate)                                                    1 

HPLC Grade Acetonitrile                                                                                                                0.5mL 

2.0M Triethylamine Acetate (60-4110-XX, TEAA, pH7)                                                                    1mL 

100 mg/mL Sodium Chloride                                                                                                            1mL 

Salt Wash Solution (5% Acetonitrile in 100mg/mL Sodium Chloride)                                              2mL 

2% Trifluoroacetic Acid (TFA)/Water (60-4040-57)                                                                            2mL 

Deionized Water 2mL50% Acetonitrile/Water containing 0.5% ammonium hydroxide*                   1mL


程序

樣品制備


1.DNA合成后,在1mL氫氧化銨或氫氧化銨/甲胺(AMA)中正常脫保護DMT-ON寡核苷酸。不需要冷凍干燥脫保護溶液。為了使該程序成功,合成必須進行DMT-ON。堿不穩定的保護基團必須用AMA或氫氧化銨(1.0mL)去除。


2.向脫保護的DMT-ON寡核苷酸中加入1mL 100 mg/mL氯化鈉溶液,最終體積為2mL。樣品的最終鹽濃度必須在50 mg/mL左右,以便在試劑盒上裝載寡聚物。可能會加載更大的卷,但這是我們建議在盒帶上加載的卷。


墨盒準備


3.將所需數量的150 mg藥筒放入輸出導向器下方機架中的歧管和收集管(如果需要)的陰魯爾端口中。我們通常使用12端口歧管。

4.打開真空,使用真空控制閥將壓力調節至~7mm Hg。(如果歧管上沒有可用的控制閥,則將流速設定為每秒1-2滴左右)。使用0.5mL乙腈和1mL 2M TEAA對濾筒進行處理。

乙腈沖洗樹脂上的有機殘留物并將其潤濕,而TEAA作為離子配對試劑來增強DMT-ON寡核苷酸與樹脂的結合。

凈化程序

5.將低聚/鹽混合物以1mL等分試樣的形式涂抹在試劑盒上(收集洗脫液并保存,以防裝載失敗或錯誤)。在裝載過程中,DMT-ON寡聚物傾向于粘附在卡盤填料上,而大多數故障序列沒有保留下來。

6.用2 x 1mL的鹽洗液清洗濾筒。這將清除盒帶中剩余的故障序列。

7.用2 x 1mL的2%TFA沖洗濾筒。拆卸DMT時,可能會看到微弱的橙色條帶


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